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博普总碱散治疗禽源大肠杆菌感染岭南黄鸡的有效性研究

发布时间：

2024-10-28

来源：

摘要：

本研究旨在评估博普总碱散治疗岭南黄鸡大肠杆菌病的有效性。试验选择350只1日龄雄性岭南黄鸡，饲养至10日龄时腹腔注射致病性大肠杆菌O78感染，随后使用不同浓度（25-1600mg/kg）的博普总碱散和5000mg/kg四味穿心莲散进行口服治疗。结果表明，博普总碱散和四味穿心莲散能有效降低岭南黄鸡受禽源性大肠杆菌感染的死亡率，并促进受损器官恢复。连续7天补充400-1600mg/kg的博普总碱散，特别是400mg/kg，能显著降低黄鸡发病率和死亡率，且对大肠杆菌感染造成的器官损伤有保护作用。因此，博普总碱散是预防和治疗禽大肠杆菌病的潜在有效药物，最佳饲料添加量为400mg/kg。

 

 

禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli，APEC）是家禽生产中最常见的细菌性病原体之一，其感染的特点是局部或周身的感染性炎症，如肠炎、输卵管炎、腹膜炎、肺炎、关节炎等。几乎所有品种和年龄阶段的家禽都是APEC的易感宿主，APEC感染导致家禽生长抑制和饲料转化率降低，造成重大的经济损失。此外，APEC还是一种重要的人畜共患病病原体。因此，开发安全高效的方法控制家禽生产中APEC感染具有重要的产业经济价值和公共卫生意义。

博普总碱散是2024奥门原料免费资料于2019年注册批准的国家二类新兽药（兽药字180415374），主要药效成分原阿片碱和别隐品碱，具有抗炎功效，可用于防治肉鸡炎症性疾病。因此，本试验以岭南黄鸡为试验对象，通过禽源大肠杆菌腹腔注射攻毒构建大肠杆菌病模型，并评估博普总碱散治疗岭南黄羽肉鸡大肠杆菌病的效果。

 

一、材料与方法

  1. 试验材料

博普总碱散，规格：含原阿片碱（C20H19NO5）和别隐品碱（C21H23NO5）的总量不得少于1.5%，其中原阿片碱（C20H19NO5）不得少于1.0%，由湖南美可达生物资源股份有效公司提供。

四味穿心莲散：由穿心莲、辣蓼、大青叶、葫芦茶组成，由华南农业大学实验兽医药厂提供。

大肠杆菌：鸡源大肠杆菌O78菌株（菌株号：CVCC1569）购自中国兽药监察所。

 

  1. 细菌培养与攻毒

将冷冻保存的鸡源大肠杆菌E. coli O78恢复至室温，在普通营养培养基上无菌刮取接种，37℃培养18-24小时后，挑选单个菌落并接种于5毫升的LB培养基中，37℃培养16小时。根据平板计数法将细菌溶液稀释成从10-1到10-10的浓度梯度，取0.1毫升的不同浓度的细菌溶液并涂布在琼脂板上，然后在恒温培养箱中以37℃培养20小时，之后进行计数。选择菌落计数为30-300的培养皿作为确定总菌落数的标准，每个浓度重复三次。细菌溶液的浓度被调整为2 ×109 CFU/mL。

10日龄的岭南黄鸡试验鸡被随机分为五组，每组15只，然后分别向每只鸡注射腹腔0.2毫升、0.4毫升、0.6毫升、0.8毫升和1.0毫升的大肠杆菌肉汤（浓度为2 ×109 CFU/mL），感染后导致50%至70%死亡率的细菌肉汤剂量被用作攻毒剂量。

 

  1. 试验动物与分组

选用300只10日龄健康、体重均匀（100 ± 5克）的岭南黄鸡随机分为10组，每个处理组包含3个重复，每个重复10只鸡，饲养在同一个笼子里。第1到第7组为博普总碱散处理组（感染，BPZJS），第8组为四味双黄连散阳性对照处理组（感染，0.5% SWSHL），第9组为感染对照组（感染，未给药），第10组为健康对照组（未感染，未给药）；具体的给药方案见表1。

第1至第9组的每只鸡注射了0.8毫升的大肠杆菌O78肉汤，第10组注射等量的生理盐水。感染和未感染的鸡被分别饲养在不同鸡舍里避免交叉感染。

 

表1.试验分组与处理

分组

攻毒

给药

试验鸡数量

1

+

25 mg/kg BPZJS

30

2

+

50 mg/kg BPZJS

30

3

+

100 mg/kg BPZJS

30

4

+

200 mg/kg BPZJS

30

5

+

400 mg/kg BPZJS

30

6

+

800 mg/kg BPZJS

30

7

+

1600 mg/kg BPZJS

30

8

+

5000 mg/kg SWCSLS

30

9

+

-

30

10

-

-

30

 

  1. 评价指标与方法

试验期间，每天观察鸡的喂食、饮水、腹泻、精神状态和其他临床表现，并记录生病和死亡鸡的数量。试验结束时，对存活的鸡进行单独称重，并计算每组的平均重量。然后，从每组中随机选择存活但已康复的测试鸡进行宰杀和解剖。治疗药物的效果通过以下标准判断。

发病率：在人工接种感染大肠杆菌后24小时以内，实验鸡有表现出精神不振、被毛脏乱、逆立，扎堆、缩颈、翅膀下垂，食欲减退等症状，均计算为发病鸡只，并根据发病实验鸡数量计算发病率。

死亡率：在试验期间，发病鸡出现鸡大肠杆菌病的典型症状并死亡，尸体剖检有典型鸡大肠杆菌病的病变特征，并从肝、脾及心脏中分离培养出鸡大肠杆菌，判定为感染死亡，并根据死亡数量计算死亡率。

治愈率：在试验期间，发病动物经给药后精神状态、食欲恢复正常，不再出现拉稀粪等临床症状均属治愈，并根据治愈数量计算治愈率。

有效率：在试验期间，发病动物经给药后其临床症状有明显减轻者，停止拉稀（肛门清净），精神略有不振，判断为有效，并根据其数量计算有效率。

无效率：在试验期间，发病动物经给药后其临床症状未见明显改善，主要表现出：精神不振、扎堆、缩颈、翅膀下垂、排黄白稀粪甚至有所加重者，判断为无效，并根据其数量计算有效率。

总有效率=治愈率+有效率，在卡方检验中使用总有效率进行检验（用X2与P值表示）。

 

  1. 数据统计与分析

数据以平均值 ± 标准差表示，并使用SPSS 17.0软件进行统计分析和处理。体重使用单因素方差分析进行分析。治愈率、有效率和死亡率指标使用卡方检验。P < 0.05被认为是显著差异。

 

二、结果与分析

1.博普总碱散对禽源大肠杆菌攻毒岭南黄鸡体重的影响

由表2可知，大肠杆菌O78攻毒显著降低了岭南黄鸡的增重，口服25-1600 mg/kg博普总碱散可显著改善大肠杆菌感染岭南黄鸡的增重，其中400-800 mg/kg给药剂量效果最佳。

 

 

表2.岭南黄鸡体重（试验末期）

分组

攻毒

给药

体重，g

1

+

25 mg/kg BPZJS

197.47±15.88e 

2

+

50 mg/kg BPZJS

204.53±18.24de 

3

+

100 mg/kg BPZJS

211.63±20.49cde

4

+

200 mg/kg BPZJS

207.84±19.27cde 

5

+

400 mg/kg BPZJS

222.33±20.99bc

6

+

800 mg/kg BPZJS

228.38±26.43b 

7

+

1600 mg/kg BPZJS

218.45±21.47bcd

8

+

5000 mg/kg SWCSLS

206.50±18.09cde 

9

+

-

183.00±19.84f

10

-

-

244.78±26.19a

注：不同肩标字母表示组间差异显著。

 

  1. 博普总碱散对禽源大肠杆菌攻毒岭南黄鸡死淘的影响

表3.治疗期岭南黄鸡死亡数（只）

分组

攻毒

给药

1天

2天

3天

4天

5天

6天

7天

8天

9天

10天

1

+

25 mg/kg BPZJS

6

5

1

1

1

0

1

0

0

0

2

+

50 mg/kg BPZJS

6

4

0

1

1

0

0

1

0

0

3

+

100 mg/kg BPZJS

5

4

0

1

0

0

1

0

0

0

4

+

200 mg/kg BPZJS

5

3

1

0

0

1

1

0

0

0

5

+

400 mg/kg BPZJS

4

3

0

0

1

1

0

0

0

0

6

+

800 mg/kg BPZJS

4

3

0

1

0

1

0

0

0

0

7

+

1600 mg/kg BPZJS

5

3

0

1

0

1

0

0

0

0

8

+

5000 mg/kg SWCSLS

6

4

1

0

1

1

0

1

0

0

9

+

-

8

6

2

1

0

1

1

0

1

0

10

-

-

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

由表3可知，大肠杆菌O78攻毒造成岭南黄鸡死亡率增加，博普总碱散给药减少了黄鸡的死亡，其中400-800mg/kg给药剂量死亡数最少，治疗效果最好。

 

  1. 博普总碱散对大肠杆菌攻毒岭南黄鸡的治疗效果

 由表4可知，50-1600mg/kg博普总碱散均对大肠杆菌感染岭南黄鸡具有治疗效果，400-800mg/kg给药剂量治愈率最高，治疗效果最好。

 

表4.博普总碱散对大肠杆菌攻毒岭南黄鸡治疗效果

分组

攻毒

给药

发病率，%

死淘率，%

治愈率，%

有效率，%

无效率，%

与第9组比有效率

与第8组比有效率

1

+

25 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

50.0

(15/30)

26.7

(8/30)

10.0

(3/30)

13.3

(4/30)

X2=2.0520,

P=0.152

X2=0.617,

P=0.432

2

+

50 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

43.3

(13/30)

30.0

(9/30)

30.0

(9/30)

10.0

(3/30)

X2=4.8000,

P=0.028

X2=0.000,

P=1.000

3

+

100 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

36.7

(11/30)

40.0

(12/30)

16.7

(5/30)

6.7

(2/30)

X2=8.5311,

P=0.003

X2=0.601,

P=0.438

4

+

200 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

36.7

(11/30)

43.3

(13/30)

13.3

(4/30)

6.7

(2/30)

X2=8.5311,

P=0.003

X2=0.601,

P=0.438

5

+

400 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

30.0

(9/30)

50.0

(15/30)

13.3

(4/30)

6.7

(2/30)

X2=11.5886, P=0.001

X2=1.684,

P=0.194

6

+

800 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

30.0

(9/30)

50.0

(15/30)

13.3

(4/30)

6.7

(2/30)

X2=11.5886, P=0.001

X2=1.684,

P=0.194

7

+

1600 mg/kg BPZJS

100

(30/30)

33.3

(10/30)

43.3

(13/30)

16.7

(5/30)

6.7

(2/30)

X2=10.0000, P=0.002

X2=1.071,

P=0.301

8

+

5000 mg/kg SWCSLS

100

(30/30)

46.7

(14/30)

36.7

(11/30)

10.0

(3/30)

6.7

(2/30)

X2=4.8000,

P=0.028

\

9

+

-

100

(30/30)

66.7

(20/30)

10.0#

(3/30)

10.0#

(3/30)

13.3#

(4/30)

\

\

10

-

-

0

(0/30)

0

(0/30)

100

(30/30)

100

(30/30)

0

(0/30)

\

\

注：#表示感染对照组的测试鸡对疾病本身显示出耐受性。

  • 结论

    在岭南黄鸡的日粮中添加50-1600 mg/kg博普总碱散，可有效治疗禽源大肠杆菌感染，且降低死亡率，促进机体恢复。其中，400-800 mg/kg的给药剂量表现出最佳治疗效果。

参考文献：Dong, Zhen, et al. "Evaluation of the efficacy of the protopine total alkaloids of Macleaya cordata (Willd.) R. Br. in controlling E. coli infection in broiler chickens." bioRxiv (2024): 2024-07.

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